Cdc6 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400796-LAC

O CDC6 humano codifica a Cdc6, uma ATPase AAA+ essencial para o licenciamento das origens de replicação do DNA e para a montagem do complexo pré-replicativo, atuando em coordenação com o ORC e o carregamento de MCM durante a mitose tardia e a fase G1. A atividade da Cdc6 é rigidamente regulada por fosforilação dependente de CDK e por degradação mediada por ubiquitina, para evitar a re-replicação e manter a estabilidade do genoma. A desregulação da expressão de CDC6 tem sido associada a estresse replicativo, ativação de checkpoints e instabilidade cromossômica, processos frequentemente estudados na oncogênese e em distúrbios proliferativos. Como fator de licenciamento da replicação, a Cdc6 é usada rotineiramente para investigar o controle do ciclo celular, a entrada em fase S e a sinalização da resposta a danos no DNA em sistemas modelo humanos.

As Partículas de Ativação Lentivirais Cdc6 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de CDC6 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Cdc6 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição CDC6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Cdc6. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo CDC6 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.