CD73 Plasmide Double Nickase (h): sc-400307-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD73 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD73 Double Nickase Plasmid (h) e il CD73 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NT5E. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD73 Antibody (D-12): sc-398260
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD73 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400307-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD73 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400307-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **NT5E** codifica **CD73** (ecto-5′-nucleotidasi), un enzima di superficie ancorato tramite glicosilfosfatidilinositolo (GPI) che idrolizza l’**AMP extracellulare** in **adenosina**, contribuendo così a modellare la segnalazione purinergica e l’equilibrio dei nucleotidi nello spazio pericellulare. Regolando l’accumulo di adenosina, CD73 influenza la segnalazione **cAMP** mediata da GPCR, la funzione di barriera endoteliale, il traffico leucocitario e i programmi di risposta all’ipossia che si intrecciano con l’adattamento metabolico e la segnalazione infiammatoria. L’attività di CD73 contribuisce alla modulazione delle risposte piastriniche e vascolari e può incidere sulla transizione epitelio-mesenchimale, sul rimodellamento dello stroma e sulla polarizzazione delle cellule immunitarie in diversi contesti tissutali. Un’espressione o un’attività enzimatica disregolata di NT5E/CD73 è stata associata ad alterazioni della regolazione immunitaria, a fenotipi di calcificazione vascolare e alla biologia del microambiente tumorale, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico in studi su infiammazione, fibrosi e vie associate al cancro.
CD73 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NT5E nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NT5E. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NT5E. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NT5E interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.