CD36 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419545-ACT

O Cd36 de camundongo codifica a CD36, um receptor scavenger multifuncional de classe B que se liga a ácidos graxos de cadeia longa e a lipoproteínas oxidadas para regular a captação de lipídios, o manejo intracelular de lipídios e o metabolismo energético. A CD36 participa de vias que controlam o transporte de ácidos graxos, a sinalização inflamatória e a formação de células espumosas de macrófagos, conectando a detecção de nutrientes às respostas imunes inatas. Além de suas funções no metabolismo do tecido adiposo, do músculo e do fígado, a atividade da CD36 influencia a biologia vascular e as respostas ao estresse oxidativo por meio de interações com lipídios modificados. A desregulação da expressão ou da sinalização de Cd36 tem sido associada a fenótipos cardiometabólicos, processos relacionados à resistência à insulina e patologias impulsionadas por inflamação em modelos murinos.

CD36 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cd36 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD36 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cd36 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cd36, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD36. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cd36 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD36 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD36 em células tumorais com expressão de Cd36 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.