Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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CD27L Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423453
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD27L Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico CD27L, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD27L Antibody (G-7): sc-365539
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD27L Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-423453 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Cd70 codifica CD27L (CD70), un ligando di membrana di tipo II appartenente alla superfamiglia del TNF, che si lega a CD27 su cellule T, cellule B e cellule NK per modulare la segnalazione costimolatoria. Le interazioni CD27–CD70 plasmano l’attivazione dell’immunità adattativa, sostenendo l’espansione, la sopravvivenza e la differenziazione dei linfociti attraverso programmi trascrizionali a valle collegati a NF-κB e MAPK. Una regolazione rigorosa dell’espressione di CD70 sulle cellule presentanti l’antigene attivate contribuisce a bilanciare il priming immunitario con l’omeostasi del sistema immunitario. Una segnalazione di CD70 deregolata è stata implicata in risposte infiammatorie aberranti, in dinamiche alterate dei centri germinali e in una disregolazione immunitaria rilevante per la ricerca sull’autoimmunità e sull’immunobiologia dei tumori.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD27L (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cd70 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cd70 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cd70 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD27L.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cd70 per lo studio della segnalazione di CD27L, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Cd70 critici per la funzione di CD27L
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cd70 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal CD27L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CD27L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cd70. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal CD27L Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CD27L (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cd70 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cd70 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.