CD274/PD-L1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401140-ACT

CD274 codifica o ligante de checkpoint imunitário PD-L1, uma glicoproteína de superfície celular que se liga ao PD-1 (PDCD1) em células T ativadas para atenuar a sinalização do TCR, a produção de citocinas e a função citotóxica. A expressão de PD-L1 é regulada por sinais inflamatórios e oncogénicos, incluindo a via IFN-γ–JAK/STAT e vias como PI3K/AKT e NF-κB, moldando a resistência imunitária adaptativa nos microambientes teciduais. A desregulação de CD274/PD-L1 contribui para a evasão imunitária em múltiplos cancros e também está implicada na regulação imunitária associada a infeções crónicas e autoimunidade, através da modulação da apresentação de antigénios e de programas de exaustão de células T. Como um nó mensurável na sinalização imunitária, o PD-L1 é frequentemente estudado em sistemas de co-cultura tumor–imunidade, ensaios de resposta ao interferão e na dissecação de vias de regulação de checkpoints.

CD274/PD-L1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD274 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD274/PD-L1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD274 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD274, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD274/PD-L1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD274 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD274/PD-L1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD274/PD-L1 em células tumorais com expressão de CD274 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.