CD130/gp130 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400301-ACT

IL6ST codifica CD130/gp130, un co-recettore ubiquitariamente espresso che trasduce il segnale ed è condiviso dalla famiglia di citochine dell’IL-6, tra cui IL6, IL11, LIF, OSM, CNTF e CT-1. In seguito al legame del ligando con le subunità recettoriali partner, gp130 attiva la segnalazione JAK/STAT3 e STAT1 e si interfaccia con le vie MAPK/ERK e PI3K/AKT per regolare la sopravvivenza, la proliferazione e la differenziazione cellulare, le risposte di fase acuta e l’omeostasi immunitaria. Una segnalazione dipendente da gp130 deregolata è implicata nell’infiammazione cronica e nell’autoimmunità, nella segnalazione microambientale che promuove i tumori e in programmi aberranti delle cellule ematopoietiche e stromali, rendendo IL6ST un nodo chiave per la dissezione delle vie di segnalazione nei modelli cellulari umani.

CD130/gp130 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IL6ST senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD130/gp130 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IL6ST nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IL6ST, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD130/gp130. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IL6ST nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD130/gp130 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD130/gp130 nelle cellule tumorali con espressione di IL6ST silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.