Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CCS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402130
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CCS Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico CCS, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CCS Antibody (H-7): sc-55561
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CCS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402130 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
La CCS (copper chaperone per la superossido dismutasi) è una metallochaperone citosolica che trasferisce rame a SOD1 e ne promuove la maturazione tramite interazione diretta e formazione di legami disolfuro. Favorendo la corretta attività di SOD1, la CCS sostiene le difese antiossidanti cellulari e limita il danno ossidativo derivante dalla respirazione mitocondriale e da altri processi redox-attivi. La funzione di CCS è collegata all’omeostasi del rame e alla segnalazione redox, con effetti a valle su vie di risposta allo stress che influenzano la stabilità proteica e la vitalità cellulare. La disregolazione dell’asse CCS–SOD1 è stata studiata in contesti di biologia dello stress ossidativo e di neurodegenerazione, in cui un’alterata gestione dei metalli e le specie reattive dell’ossigeno contribuiscono a fenotipi associati alla malattia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CCS (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CCS in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CCS insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CCS a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CCS.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CCS per lo studio della segnalazione di CCS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CCS critici per la funzione di CCS
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CCS per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal CCS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CCS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CCS. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal CCS Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CCS (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CCS per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CCS definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.