Plasmide Double Nickase (m) CBP/KAT3A/CREBBP: sc-419797-NIC

Crebbp code chez la souris la protéine de liaison à CREB (CBP/KAT3A), un coactivateur transcriptionnel multifonctionnel et une histone acétyltransférase qui acétyle les histones ainsi que de nombreux substrats non histoniques, modulant ainsi l’accessibilité de la chromatine et la production transcriptionnelle. CBP intègre des signaux provenant de CREB, des récepteurs nucléaires, de p53 et de facteurs associés à la voie Wnt/β-caténine afin de réguler le contrôle du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN, la plasticité neuronale et des programmes de différenciation spécifiques de lignée. En modulant l’activité des enhancers et l’élongation transcriptionnelle, CBP contribue à coordonner des réseaux géniques impliqués dans le développement et la fonction immunitaire. La dérégulation de l’acétylation dépendante de CREBBP et de l’activité de coactivateur est associée à des états épigénétiques altérés, pertinents pour certains phénotypes du développement et des programmes transcriptionnels liés au cancer.

CBP/KAT3A/CREBBP Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Crebbp dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Crebbp. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Crebbp. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Crebbp.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.