catalase Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419459-ACT

Mouse Cat codifica la catalasi, un enzima eme perossisomiale che decompone il perossido di idrogeno in acqua e ossigeno per mantenere l’equilibrio redox cellulare. Limitando l’accumulo di H2O2, la catalasi modula la segnalazione delle specie reattive dell’ossigeno, protegge lipidi e proteine dal danno ossidativo e favorisce il coordinamento metabolico tra perossisomi e mitocondri. L’attività di Cat si integra con le reti di difesa antiossidante e con le risposte infiammatorie allo stress, influenzando processi quali la senescenza, la regolazione dell’apoptosi e l’adattamento metabolico. Alterazioni della funzione o dell’espressione della catalasi sono spesso studiate in contesti di fenotipi associati allo stress ossidativo, inclusi neurodegenerazione, disfunzioni cardiometaboliche e modelli di danno tissutale nei sistemi murini.

catalase Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cat senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

catalase Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cat nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cat, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di catalase. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cat nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da catalase nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via catalase nelle cellule tumorali con espressione di Cat silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.