CAT-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403628

Visão geral

SLC7A1 codifica o CAT-1 (transportador 1 de aminoácidos catiônicos), um transportador de alta afinidade da membrana plasmática responsável pela captação, independente de sódio, de L-arginina, L-lisina e L-ornitina. Ao controlar a disponibilidade intracelular de arginina, o CAT-1 influencia a síntese de óxido nítrico, o metabolismo de poliaminas e a sinalização ligada a mTOR e ao estado redox, que conecta o transporte de nutrientes ao crescimento celular e às respostas ao estresse. A atividade do CAT-1 também contribui para a função de células endoteliais e imunes por meio da regulação do fluxo de arginina e de programas metabólicos a jusante. A desregulação do transporte de aminoácidos catiônicos tem sido associada a alterações na biologia vascular, inflamação e remodelamento metabólico em contextos celulares relevantes para doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CAT-1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SLC7A1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SLC7A1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SLC7A1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CAT-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SLC7A1 para a investigação da sinalização de CAT-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SLC7A1 críticos para a função CAT-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SLC7A1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CAT-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CAT-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SLC7A1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CAT-1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CAT-1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SLC7A1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SLC7A1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.