Plásmido CRISPR de Activación (h) CARD 9: sc-402214-ACT

La proteína 9 que contiene dominio de reclutamiento de caspasas (CARD9) es una proteína adaptadora expresada predominantemente en linajes mieloides que acopla la señalización de los receptores de lectinas tipo C a respuestas inmunitarias innatas posteriores. Al detectar ligandos fúngicos y de otros microorganismos, CARD9 integra señales de receptores como Dectin-1 y Dectin-2 para promover la activación de las vías de NF-κB y MAPK, la producción de citocinas asociadas al inflamasoma y la configuración de programas inflamatorios con sesgo hacia Th17. Las alteraciones genéticas y funcionales de CARD9 se han vinculado con interacciones hospedador–microbio modificadas e inflamación desregulada, con asociaciones que abarcan desde la susceptibilidad a infecciones fúngicas invasivas hasta fenotipos inflamatorios mediados por el sistema inmunitario. Como nodo de señalización en la interfaz entre el reconocimiento de patrones y el control transcripcional, CARD9 se estudia ampliamente en vías que gobiernan la activación mieloide, las redes de citocinas y la inmunidad de barrera.

CARD 9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CARD9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CARD 9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CARD9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CARD9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CARD 9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CARD9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CARD 9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CARD 9 en células tumorales con expresión de CARD9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.