Plásmido Doble Nickase (h) calsequestrin 1: sc-403375-NIC

CASQ1 codifica la calsequestrina 1, una proteína de alta capacidad de unión a Ca²⁺ localizada en la luz del retículo sarcoplásmico del músculo esquelético, donde amortigua el Ca²⁺ y ayuda a moldear el acoplamiento excitación–contracción. Al modular la disponibilidad de Ca²⁺ luminal y la cinética de liberación de Ca²⁺ del receptor de rianodina (RYR1), la calsequestrina 1 contribuye a la homeostasis del Ca²⁺ y a ciclos coordinados de contracción/relajación muscular. Las alteraciones en la función o la expresión de CASQ1 pueden perturbar la señalización intracelular de Ca²⁺ y las respuestas al estrés vinculadas a una liberación anómala de Ca²⁺, una contractilidad deficiente y una mayor susceptibilidad a fenotipos de disfunción muscular. Como nodo central en el manejo del Ca²⁺ por el retículo sarcoplásmico, CASQ1 es relevante para estudios mecanísticos de la señalización dependiente de Ca²⁺, la proteostasis y la remodelación metabólica en las fibras musculares.

calsequestrin 1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CASQ1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CASQ1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CASQ1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CASQ1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.