Calponin 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401397-ACT

CNN1 codifica a calponina 1, uma proteína reguladora de ligação à actina, enriquecida no músculo liso e em estados semelhantes a miofibroblastos, nos quais modula a contratilidade actomiosina. Ao ligar-se à actina filamentosa e influenciar a atividade ATPase da miosina, a calponina 1 contribui para a organização do citoesqueleto, a adesão celular e a geração de força contrátil em vias que coordenam a sinalização RhoA/ROCK e a dinâmica das fibras de stress de actina. Alterações na expressão de CNN1 são usadas como marcador de diferenciação de músculo liso e de mudança fenotípica, processos relevantes para a remodelação vascular e respostas fibroproliferativas. A desregulação de programas citoesqueléticos associados à calponina 1 foi relatada em contextos de rigidez e motilidade tecidual anormais, sustentando o seu uso em estudos de plasticidade celular e mecanobiologia.

Calponin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CNN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Calponin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CNN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CNN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Calponin 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CNN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Calponin 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Calponin 1 em células tumorais com expressão de CNN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.