Particules Lentivirales d'Activation (h) Calpain 15: sc-411016-LAC

CAPN15 code la calpaïne 15, un membre atypique de la famille des protéases cystéine dépendantes du calcium, impliquées dans une protéolyse régulée et le remodelage des protéines au sein des cellules. La signalisation des calpaïnes influence la dynamique du cytosquelette, le trafic membranaire et la modulation, dépendante du contexte, des réseaux de signalisation qui façonnent la morphologie cellulaire et les réponses au stress. L’expression de CAPN15 et l’activité de la voie des calpaïnes ont été étudiées en lien avec des processus de neurodéveloppement et l’homéostasie cellulaire, où une régulation altérée des protéases peut affecter la connectivité neuronale et le maintien des tissus. En tant que gène humain, CAPN15 constitue un nœud utile pour étudier la protéostasie, l’intégration de la signalisation intracellulaire et des phénotypes liés à un contrôle protéolytique dérégulé.

Les particules d'activation lentivirales Calpain 15 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CAPN15 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Calpain 15 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CAPN15, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Calpain 15. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CAPN15 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.