Plásmido Doble Nickase (h) Calbindin D28K: sc-400718-NIC

CALB1 codifica la calbindina D28K, una proteína citosólica de alta afinidad de unión a Ca2+ que amortigua el calcio intracelular y modela la amplitud y la cinética de los transitorios de Ca2+. Al modular la señalización dependiente de calcio, influye en la excitabilidad neuronal, la integración sináptica y los programas transcripcionales dependientes de la actividad, y contribuye a la resiliencia celular frente al estrés mediado por Ca2+. La calbindina D28K se utiliza ampliamente como marcador molecular de poblaciones neuronales específicas y participa en procesos vinculados a la homeostasis del calcio, la función mitocondrial y las respuestas al estrés oxidativo. Se han descrito patrones alterados de expresión de CALB1 en contextos de investigación neurológica y neuropsiquiátrica, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de la función de los circuitos y de la desregulación del calcio.

Calbindin D28K El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CALB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CALB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CALB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CALB1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.