Cacna2d2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425312

Descripción general

Cacna2d2 codifica la subunidad auxiliar α2δ-2 de los canales de calcio dependientes de voltaje, un regulador clave del tráfico de los canales, su expresión en la membrana y sus propiedades biofísicas, que determinan la entrada de calcio durante la excitabilidad neuronal y la transmisión sináptica. Al modular la función de los canales CaV, CACNA2D2 influye en la señalización dependiente de la actividad, la liberación de neurotransmisores y programas de expresión génica dependientes de calcio que afectan el desarrollo y la plasticidad de los circuitos. Alteraciones genéticas y funcionales en subunidades α2δ se han relacionado con fenotipos del neurodesarrollo y neurológicos, y Cacna2d2 se asocia en particular con la función cerebelosa y las vías de coordinación motora. Estas características hacen de Cacna2d2 una diana útil para analizar mecanismos accesorios de los canales de calcio en neurobiología y en modelos de enfermedad centrados en electrofisiología.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Cacna2d2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cacna2d2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cacna2d2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cacna2d2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Cacna2d2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cacna2d2 para la investigación de la señalización de Cacna2d2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cacna2d2 críticos para la función de Cacna2d2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cacna2d2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Cacna2d2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Cacna2d2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cacna2d2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Cacna2d2 (m) y el plásmido HDR Cacna2d2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cacna2d2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cacna2d2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.