CA XI Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419451

Panoramica

Il gene murino Car11 codifica l’anidrasi carbonica XI (CA XI), un membro della famiglia delle anidrasi carboniche che si ritiene contribuisca alla regolazione del pH cellulare e alla gestione del bicarbonato/CO₂ all’interno di microambienti metabolici, sebbene la sua attività catalitica sia riportata come atipica rispetto alle anidrasi carboniche classiche. L’espressione di CA XI è stata associata ai tessuti neurali, implicando Car11 in processi legati alla fisiologia neuronale e all’omeostasi di ioni e pH. Attraverso effetti sull’equilibrio acido–base intracellulare ed extracellulare, Car11 può intersecarsi con vie che influenzano il metabolismo cellulare, la differenziazione e l’adattamento al microambiente. Un controllo del pH deregolato e un’alterata espressione dei membri della famiglia delle anidrasi carboniche sono rilevanti per studi di neurobiologia e del rimodellamento metabolico associato a malattia in modelli sperimentali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CA XI (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Car11 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Car11 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Car11 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CA XI.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Car11 per lo studio della segnalazione di CA XI, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Car11 critici per la funzione di CA XI
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Car11 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CA XI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CA XI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Car11. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CA XI Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CA XI (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Car11 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Car11 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.