C22orf32 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402149-ACT

SMDT1はC22orf32（single-pass membrane protein with aspartate rich tail 1）をコードしており、ミトコンドリア内膜に存在する小型の構成要素として、ミトコンドリアのCa2+制御およびバイオエネルギー調節に寄与します。SMDT1はミトコンドリアカルシウムユニポーター（MCU）複合体の形成と機能に関与し、Ca2+依存的な酸化的リン酸化の制御、代謝シグナル伝達、ならびに細胞のストレス応答に影響を与えます。C22orf32はミトコンドリアへのCa2+流入を調整することで、アポトーシス感受性、活性酸素種（ROS）の恒常性、ミトコンドリアダイナミクスなどの過程にも影響し得ます。ミトコンドリアCa2+シグナルの制御異常は心代謝性疾患や神経変性の表現型と関連していることから、SMDT1の調節はミトコンドリア機能障害の機序研究において重要です。

C22orf32 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SMDT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

C22orf32 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SMDT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSMDT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性C22orf32の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSMDT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるC22orf32依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSMDT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるC22orf32経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。