Plásmido CRISPR de Activación (h) C1orf115: sc-413237-ACT

C1orf115 (humano) codifica una proteína poco caracterizada y con anotación funcional limitada, lo que sugiere funciones que pueden depender del contexto y que se esclarecen mejor mediante estudios de perturbación. Los conjuntos de datos disponibles de transcritos y proteómica indican patrones de expresión específicos de tipo celular, lo que respalda su investigación en diferenciación de linajes, programas adaptativos al estrés u otros estados celulares regulados. Dado que los vínculos mecanísticos con vías de señalización canónicas siguen estando incompletamente definidos, la modulación de la expresión de C1orf115 resulta útil para cartografiar respuestas transcripcionales posteriores y redes de interacción proteica. Las firmas de expresión alterada de marcos de lectura abiertos no caracterizados como C1orf115 se examinan con frecuencia en conjuntos de datos de cáncer y neurobiología, por lo que es relevante para estudios exploratorios de vías asociadas a enfermedad sin presuponer causalidad.

C1orf115 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de C1orf115 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

C1orf115 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus C1orf115 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional C1orf115, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de C1orf115. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo C1orf115 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de C1orf115 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía C1orf115 en células tumorales con expresión de C1orf115 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.