c-Rel Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422641-ACT

Rel codifica c-Rel, um membro da família de fatores de transcrição NF-κB que regula programas induzíveis de expressão gênica responsáveis por controlar a ativação, a proliferação e a sobrevivência de células imunes em tecidos de camundongo. Após estímulo por receptores de antígeno, receptores do tipo Toll (TLRs) ou citocinas, c-Rel contribui para a sinalização canônica de NF-κB a jusante da degradação de IκB mediada por IKK, permitindo respostas transcricionais no núcleo. c-Rel é particularmente relevante para a diferenciação de linfócitos e para redes transcricionais inflamatórias, nas quais uma atividade alterada pode remodelar a produção de citocinas e a homeostase imune. A desregulação da sinalização Rel/c-Rel é frequentemente estudada no contexto de inflamação semelhante à autoimune, respostas a infecções e estados transcricionais oncogênicos em linhagens hematopoéticas.

c-Rel O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Rel sem alterar a sequência de ADN subjacente.

c-Rel O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Rel em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Rel, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de c-Rel. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Rel nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de c-Rel no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via c-Rel em células tumorais com expressão de Rel silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.