Plásmido CRISPR de Activación (m) C/EBP ζ: sc-419622-ACT

Cebpz codifica el factor de transcripción C/EBP zeta (C/EBPζ), un miembro de la familia de proteínas de unión a CCAAT/potenciadores (CCAAT/enhancer-binding protein) que modula programas de expresión génica implicados en el control del crecimiento celular, la diferenciación y la transcripción sensible al estrés. C/EBPζ puede actuar como un regulador dependiente del contexto al asociarse con otros factores bZIP para ajustar la actividad de promotores y potenciadores, conectando señales extracelulares con cambios en la transcripción mediada por la ARN polimerasa II. En sistemas murinos, la alteración de la actividad de C/EBPζ es relevante para estudios de señalización inflamatoria, adaptación metabólica y decisiones de destino celular en los que las redes de la familia C/EBP se entrecruzan con vías de citocinas y factores de crecimiento. Estas propiedades hacen de Cebpz un nodo útil para diseccionar los circuitos transcripcionales que subyacen a los cambios fenotípicos observados en modelos celulares relevantes para enfermedades, sin implicar resultados clínicos.

C/EBP ζ El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Cebpz sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

C/EBP ζ El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Cebpz en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Cebpz, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de C/EBP ζ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Cebpz y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de C/EBP ζ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía C/EBP ζ en células tumorales con expresión de Cebpz silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.