BTEB1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402170-ACT

KLF9 (BTEB1) codifica un fattore di trascrizione tipo Krüppel che si lega a elementi promotori ricchi in GC per regolare programmi dipendenti dal contesto che controllano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e l’espressione genica in risposta allo stress. Nelle cellule umane, BTEB1 integra segnali provenienti da vie associate ai recettori nucleari e alla MAPK, modulando output trascrizionali legati all’omeostasi metabolica e alla responsività endocrina. Alterazioni dell’espressione di KLF9 sono state associate a proliferazione deregolata, segnalazione infiammatoria e rimodellamento specifico di linea cellulare, rendendolo un nodo utile per studiare perturbazioni delle reti trascrizionali. Queste proprietà supportano ricerche meccanicistiche sulla regolazione della cromatina, sulla trascrizione dipendente dallo stimolo e su firme di espressione genica rilevanti per la malattia.

BTEB1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KLF9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BTEB1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KLF9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KLF9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BTEB1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KLF9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BTEB1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BTEB1 nelle cellule tumorali con espressione di KLF9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.