Partículas Lentivirales de Activación (h) BTBD14B: sc-410250-LAC

NACC1 codifica BTBD14B, un factor nuclear que contiene un dominio BTB/POZ e interviene en el control de la transcripción y en la regulación asociada a la cromatina mediante interacciones proteína–proteína. Este gen se ha vinculado a programas que gobiernan la proliferación, la supervivencia y la diferenciación celular, con efectos aguas abajo sobre vías que modulan la progresión del ciclo celular y las respuestas al estrés. Se han descrito alteraciones en la expresión de NACC1 en múltiples contextos patológicos, incluida la biología del cáncer y fenotipos del neurodesarrollo, lo que respalda su uso como nodo funcional en estudios de redes reguladoras. Como factor asociado a la transcripción, BTBD14B se investiga con frecuencia por su contribución a los estados de expresión génica y a la plasticidad celular.

Las partículas de activación lentiviral BTBD14B (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de NACC1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral BTBD14B (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción NACC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de BTBD14B. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo NACC1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.