Partículas Lentivirales de Activación (h) BPTF: sc-404092-LAC

BPTF (factor de transcripción con dominio bromodominio y dedo PHD) es un componente central del complejo NURF de remodelación de cromatina, que reconoce marcas de histonas mediante su dedo PHD y su bromodominio para regular el posicionamiento de los nucleosomas y la salida transcripcional. Al modular la accesibilidad de la cromatina, BPTF influye en programas de expresión génica dependientes de la ARN polimerasa II implicados en el control del ciclo celular, la especificación de linaje y las respuestas al daño del ADN. Participa en la regulación epigenética a lo largo de vías del desarrollo y proliferativas, vinculando los paisajes de modificaciones de histonas con la actividad de los factores de transcripción. La expresión o función desregulada de BPTF se ha asociado con estados alterados de la cromatina observados en la biología del cáncer y en procesos del neurodesarrollo, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación transcripcional.

Las partículas de activación lentiviral BPTF (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de BPTF en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral BPTF (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción BPTF, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de BPTF. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo BPTF y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.