Plasmide Double Nickase (h) BPAG1: sc-403388-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) BPAG1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BPAG1 Double Nickase (h) et le plasmide BPAG1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DST. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: BPAG1 Antibody (1B10): sc-293499
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) BPAG1 | sc-403388-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) BPAG1 | sc-403388-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La dystonine (DST), également connue sous le nom de BPAG1, code une grande protéine de liaison du cytosquelette appartenant à la famille des plakines, qui connecte les filaments intermédiaires à l’actine, aux microtubules et aux complexes jonctionnels associés à la membrane. Dans les contextes épithélial et neuronal, BPAG1 contribue à l’intégrité des hémidesmosomes, à l’adhérence cellule–matrice et à l’organisation du cytosquelette, influençant ainsi la polarité cellulaire, la migration et la résistance aux contraintes mécaniques. Les isoformes de DST participent à des processus coordonnés de pontage du cytosquelette et de trafic intracellulaire, qui modulent l’architecture tissulaire et la stabilité axonale. La perturbation génétique ou l’expression altérée de DST a été associée à des phénotypes cutanés bulleux et à des caractéristiques neurodégénératives, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des mécanismes de défaillance du cytosquelette et de la biologie des jonctions.
BPAG1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DST dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DST. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DST. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DST.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.