BORIS Plasmide Double Nickase (h): sc-403313-NIC

CTCFL codifica BORIS (Brother of the Regulator of Imprinted Sites), un regolatore trascrizionale cancer-testis correlato a CTCF che si lega al DNA in modo sequenza-specifico per influenzare l’organizzazione della cromatina e i programmi di espressione genica. BORIS partecipa alla regolazione epigenetica, inclusi il controllo dell’imprinting e la modulazione dell’accessibilità della cromatina, e può intersecarsi con processi quali l’isolamento trascrizionale, la comunicazione enhancer–promotore e le reti trascrizionali associate alla linea germinale. Un’espressione aberrante di BORIS è stata riportata in diversi contesti tumorali ed è spesso studiata per i suoi legami con stati epigenetici deregolati, circuiti trascrizionali alterati e fenotipi di stabilità genomica. In quanto gene umano con espressione normale ristretta a specifici tessuti, CTCFL è un modello utile per indagare i meccanismi di controllo trascrizionale dipendente dalla cromatina e la riprogrammazione oncogenica.

BORIS Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CTCFL nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CTCFL. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CTCFL. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CTCFL interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.