Plasmide CRISPR/Cas9 KO Bob 1 (h): sc-400771

Présentation

POU2AF1 (Bob 1/OBF-1) est un coactivateur transcriptionnel restreint aux cellules B qui se lie à OCT1/POU2F1 et à OCT2/POU2F2 afin de potentialiser la transcription des gènes des immunoglobulines ainsi que, plus largement, les programmes d’expression génique propres aux cellules B. Il soutient les réponses des centres germinatifs, la recombinaison de commutation de classe et la différenciation en plasmocytes en intégrant l’activité des enhancers au niveau des motifs octamères avec des signaux qui modulent l’activation et la survie des cellules B. Une expression dérégulée de POU2AF1 et les circuits transcriptionnels associés ont été rapportés dans des hémopathies malignes des cellules B, notamment des lymphomes et des leucémies, ainsi que dans des phénotypes immunitaires liés à des réponses humorales altérées. Ainsi, Bob 1 est couramment étudié dans les voies qui contrôlent l’identité des cellules B, la maturation induite par l’antigène et la régulation transcriptionnelle des gènes effecteurs de l’immunité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Bob 1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène POU2AF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du POU2AF1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert POU2AF1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Bob 1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en POU2AF1 pour l'étude de la signalisation de Bob 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de POU2AF1 essentiels à la fonction de Bob 1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de POU2AF1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Bob 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Bob 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus POU2AF1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Bob 1 plasmide HDR (h) et le Bob 1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie POU2AF1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles POU2AF1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.