BMP-6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401979

Panoramica

BMP6 codifica la proteina morfogenetica ossea 6 (BMP-6), un ligando secreto della superfamiglia del TGF-β che segnala principalmente attraverso i recettori BMP di tipo I/II con attività chinasi serina/treonina, attivando programmi trascrizionali dipendenti da SMAD1/5/8. BMP-6 contribuisce alla differenziazione osteogenica e condrogenica, alla regolazione della matrice extracellulare e al rimodellamento tissutale, e interseca anche contesti di segnalazione legati al patterning dello sviluppo e alla fibrosi. Nell’omeostasi del ferro, BMP-6 è un regolatore upstream chiave dell’espressione epatica dell’epcidina tramite la via BMP/SMAD, collegando l’attività di BMP6 all’equilibrio sistemico del ferro. Una segnalazione BMP6 disregolata è stata associata a disturbi che coinvolgono mineralizzazione aberrante, fibrosi e alterazioni del metabolismo del ferro, a supporto di studi meccanicistici in modelli cellulari pertinenti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BMP-6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BMP6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BMP6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BMP6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BMP-6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BMP6 per lo studio della segnalazione di BMP-6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BMP6 critici per la funzione di BMP-6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BMP6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BMP-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal BMP-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BMP6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BMP-6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR BMP-6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BMP6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BMP6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.