beta Actin Plasmide Double Nickase (m): sc-418965-NIC

Il gene Actb del topo codifica la beta-actina, una proteina citoscheletrica altamente conservata che polimerizza in actina filamentosa per sostenere la forma cellulare, la tensione corticale e il trasporto intracellulare. La dinamica dell’actina coordina processi fondamentali, tra cui migrazione cellulare, adesione, citocinesi e meccanotrasduzione, attraverso vie che coinvolgono le GTPasi della famiglia Rho, la segnalazione mediata dalle integrine e regolatori leganti l’actina come il complesso Arp2/3 e la cofilina. L’alterazione del rimodellamento dell’actina influisce sullo sviluppo e sull’omeostasi dei tessuti ed è ampiamente rilevante per fenotipi associati a malattie che comportano cambiamenti nella motilità cellulare, nella funzione di barriera e nell’integrità del citoscheletro. In quanto nodo centrale delle reti citoscheletriche, Actb è spesso utilizzato per studiare le relazioni struttura–funzione e per normalizzare o fare da riferimento (“benchmark”) a perturbazioni cellulari in sistemi modello murini.

beta Actin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Actb nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Actb. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Actb. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Actb interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.