beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-419239-LAC

Atp1b3 codifica la subunità β3 della Na⁺/K⁺-ATPasi, un complesso enzimatico essenziale della membrana plasmatica che mantiene i gradienti elettrochimici di Na⁺ e K⁺ necessari per il potenziale di membrana, l’omeostasi osmotica e il trasporto attivo secondario. Sostenendo processi dipendenti dagli ioni, ATP1B3 influenza l’eccitabilità cellulare, l’assorbimento di nutrienti, la regolazione del volume e le vie di segnalazione collegate alla polarità epiteliale e all’attivazione delle cellule immunitarie. Alterazioni nella composizione o nell’espressione delle subunità della Na⁺/K⁺-ATPasi sono state associate a compromissione della funzione di barriera, segnalazione infiammatoria aberrante e risposte allo stress rilevanti per la biologia delle malattie cardiovascolari, neurologiche e metaboliche. Nei modelli murini, modulare l’espressione di Atp1b3 può aiutare a chiarire come i meccanismi di trasporto ionico coordinino la fisiologia dei tessuti e le risposte a lesione o infiammazione.

Le particelle di attivazione lentivirale beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Atp1b3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Atp1b3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Atp1b3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.