BCKDE1A Double Nickase Plasmid (h): sc-417950-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BCKDE1A Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BCKDE1A Double-Nickase-Plasmid (h) und BCKDE1A Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BCKDHA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: BCKDE1A: sc-271538
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BCKDE1A Double Nickase Plasmid (h) | sc-417950-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BCKDE1A Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417950-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BCKDHA kodiert die E1α‑Untereinheit des Branched-Chain-α‑Ketoacid-Dehydrogenase-(BCKDH)-Komplexes, eines mitochondrialen Enzymsystems, das die oxidative Decarboxylierung von α‑Ketosäuren katalysiert, die aus verzweigtkettigen Aminosäuren hervorgehen. Diese Aktivität ist zentral für den Abbau von Valin, Leucin und Isoleucin und verknüpft den Aminosäureumsatz mit der Bildung von Acetyl‑CoA und Succinyl‑CoA, wodurch das mitochondriale Redoxgleichgewicht und der Energiestoffwechsel beeinflusst werden. Die Funktion von BCKDHA wird durch die Phosphorylierungsdynamik des BCKDH‑Komplexes sowie durch die Verfügbarkeit mitochondrialer Cofaktoren reguliert und integriert damit Nährstoffsensorik mit dem metabolischen Fluss. Störungen von BCKDHA sind mit einem beeinträchtigten Stoffwechsel verzweigtkettiger Aminosäuren und angeborenen Stoffwechselstörungen wie der Ahornsirupkrankheit (Maple Syrup Urine Disease) assoziiert, was BCKDHA für Studien zu metabolischem Stress, mitochondrialer Dysfunktion und aminosäuregetriebener Signalgebung relevant macht.
BCKDE1A Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BCKDHA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BCKDHA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BCKDHA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BCKDHA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.