Plasmide Double Nickase (h) BCKDE1A: sc-417950-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) BCKDE1A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BCKDE1A Double Nickase (h) et le plasmide BCKDE1A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant BCKDHA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: BCKDE1A Antibody (H-5): sc-271538
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) BCKDE1A | sc-417950-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) BCKDE1A | sc-417950-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BCKDHA code la sous-unité E1α du complexe déshydrogénase des α-cétoacides à chaîne ramifiée (BCKDH), un système enzymatique mitochondrial qui catalyse la décarboxylation oxydative des α-cétoacides dérivés des acides aminés à chaîne ramifiée. Cette activité est essentielle au catabolisme de la valine, de la leucine et de l’isoleucine, et relie le renouvellement des acides aminés à la production d’acétyl-CoA et de succinyl-CoA, influençant l’équilibre rédox mitochondrial et le métabolisme énergétique. La fonction de BCKDHA est régulée par la dynamique de phosphorylation du complexe BCKDH et par la disponibilité des cofacteurs mitochondriaux, intégrant la détection des nutriments aux flux métaboliques. Les altérations de BCKDHA sont associées à une perturbation du métabolisme des acides aminés à chaîne ramifiée et à des erreurs innées du métabolisme telles que la maladie des urines à odeur de sirop d’érable, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du stress métabolique, du dysfonctionnement mitochondrial et des voies de signalisation dépendantes des acides aminés.
BCKDE1A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BCKDHA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BCKDHA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BCKDHA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BCKDHA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.