BCAS2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405943

Panoramica

BCAS2 (breast carcinoma amplified sequence 2) codifica una proteina nucleare conservata che funge da componente centrale del complesso spliceosomiale associato a Prp19 e supporta lo splicing del pre‑mRNA e la fedeltà dei siti di splicing. Attraverso i suoi ruoli nell’elaborazione dell’RNA e nel mantenimento del genoma, BCAS2 influenza la progressione del ciclo cellulare, i programmi trascrizionali e le risposte cellulari allo stress. Alterazioni dell’espressione di BCAS2 e la disregolazione dello splicing sono state associate a fenotipi oncogeni in diversi contesti tumorali, collegando questo fattore a vie che governano la proliferazione e la segnalazione del danno al DNA. In quanto regolatore della maturazione dell’RNA, BCAS2 è rilevante anche per lo studio di vulnerabilità dipendenti dallo spliceosoma e di ampi rimodellamenti trascrittomici nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BCAS2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BCAS2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BCAS2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BCAS2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BCAS2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BCAS2 per lo studio della segnalazione di BCAS2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BCAS2 critici per la funzione di BCAS2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BCAS2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BCAS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal BCAS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BCAS2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BCAS2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR BCAS2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BCAS2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BCAS2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.