BBS9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404329-ACT

BBS9 codifica un componente centrale del complesso BBSome, che coordina il traffico delle proteine di membrana da e verso il ciglio primario, sostenendo la composizione della membrana ciliare e la fedeltà della trasduzione del segnale. Interagendo con altre proteine BBS, BBS9 contribuisce a processi associati al trasporto intraflagellare che modellano la ciliogenesi e regolano la localizzazione dei recettori per vie come Hedgehog e altre reti di segnalazione dipendenti dal ciglio. L’alterazione della funzione di BBS9 è collegata alla biologia delle ciliopatie, in cui un traffico ciliare modificato può influenzare la patterning dello sviluppo, la segnalazione sensoriale e l’omeostasi energetica. Queste caratteristiche rendono BBS9 un bersaglio utile per studiare i meccanismi dipendenti dal ciglio, la dinamica del trasporto dei recettori e le relazioni genotipo–fenotipo in modelli cellulari umani.

BBS9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BBS9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BBS9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BBS9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BBS9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BBS9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BBS9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BBS9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BBS9 nelle cellule tumorali con espressione di BBS9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.