Plasmide Double Nickase (h) BBS10: sc-408538-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) BBS10 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BBS10 Double Nickase (h) et le plasmide BBS10 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant BBS10. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: BBS10 Antibody (A-3): sc-518239
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) BBS10 | sc-408538-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) BBS10 | sc-408538-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BBS10 code une protéine de type chaperonine qui agit au sein du complexe BBSome/chaperonine pour soutenir la ciliogenèse ainsi que l’assemblage et le trafic des protéines membranaires ciliaires. Par son rôle dans la formation du cil primaire et les processus liés au transport intraflagellaire, BBS10 influence des réseaux de signalisation dépendants des cils, notamment la voie Hedgehog et d’autres voies sensorielles qui coordonnent la polarité cellulaire, la prolifération et la différenciation. L’altération de BBS10 perturbe la structure ciliaire et le trafic des récepteurs, ce qui l’associe à des phénotypes pléiotropes caractéristiques des ciliopathies. BBS10 humain est donc largement étudié dans des modèles du syndrome de Bardet–Biedl et d’autres troubles liés aux cils afin d’explorer les mécanismes du développement des organes, du métabolisme et des fonctions sensorielles.
BBS10 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BBS10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BBS10. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BBS10. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BBS10.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.