BAI-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406051

Panoramica

ADGRB2 codifica il recettore di adesione accoppiato a proteine G BAI-2 (brain-specific angiogenesis inhibitor 2, inibitore 2 dell’angiogenesi specifico del cervello), un recettore di membrana multidominio arricchito nel sistema nervoso e implicato nelle interazioni cellula–cellula e cellula–matrice. In quanto GPCR di adesione, BAI-2 integra segnali extracellulari con programmi di segnalazione intracellulari che modellano l’organizzazione del citoscheletro, la dinamica di membrana e la comunicazione cellulare, contribuendo a processi quali lo sviluppo neuronale e l’omeostasi tissutale. Una segnalazione deregolata dei GPCR di adesione è stata associata ad alterazioni dei microambienti angiogenici e infiammatori e a cambiamenti della motilità cellulare e degli stati di differenziamento. Di conseguenza, ADGRB2/BAI-2 è oggetto di studio in contesti che includono la neurobiologia e le reti di segnalazione associate ai tumori, in cui vie dipendenti dall’adesione influenzano fenotipi rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BAI-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ADGRB2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ADGRB2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ADGRB2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BAI-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ADGRB2 per lo studio della segnalazione di BAI-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ADGRB2 critici per la funzione di BAI-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ADGRB2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BAI-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal BAI-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ADGRB2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BAI-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR BAI-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ADGRB2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ADGRB2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.