BAF60a Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402641-ACT

SMARCD1 codifica a BAF60a, uma subunidade central do complexo de remodelamento de cromatina dependente de ATP SWI/SNF (BAF), que regula o posicionamento dos nucleossomos e a acessibilidade da cromatina para controlar programas transcricionais. A BAF60a coordena interações entre fatores de transcrição e a maquinaria de remodelamento para influenciar a especificação de linhagem, a progressão do ciclo celular e a expressão gênica responsiva a estímulos, incluindo vias ligadas ao desenvolvimento e à diferenciação. Como parte do complexo BAF, o SMARCD1 contribui para a regulação epigenética de estados de enhancers e promotores e interage com redes de sinalização, como circuitos transcricionais de receptores hormonais e de resposta ao estresse. A desregulação de componentes do SWI/SNF está associada a estados de cromatina alterados observados em múltiplos cânceres e em fenótipos do neurodesenvolvimento, tornando a BAF60a um alvo relevante para estudos mecanísticos do controle transcricional.

BAF60a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SMARCD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BAF60a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SMARCD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SMARCD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BAF60a. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SMARCD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BAF60a no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BAF60a em células tumorais com expressão de SMARCD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.