Partículas Lentivirales de Activación (h) B7-1: sc-401971-LAC

CD80 (B7-1) es un ligando coestimulador de la superfamilia de las inmunoglobulinas, de tipo I y transmembrana, que se expresa principalmente en células presentadoras de antígeno, donde regula la activación de la inmunidad adaptativa. Al unirse a CD28 y CTLA-4 en las células T, B7-1 ajusta el equilibrio entre las señales de activación e inhibición, modulando la proliferación impulsada por el TCR, la producción de citocinas y la tolerancia periférica. CD80 participa en la formación de la sinapsis inmunológica y en vías de puntos de control coestimuladores que influyen en la presentación de antígenos, la polarización inflamatoria y la diferenciación de linfocitos. La expresión desregulada de CD80 se ha asociado con inflamación autoinmunitaria, biología del rechazo de trasplantes y contextos de evasión inmunitaria tumoral, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación inmunitaria.

Las partículas de activación lentiviral B7-1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CD80 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral B7-1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CD80, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de B7-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CD80 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.