Plásmido Doble Nickase (h) B7-1: sc-401971-NIC

CD80 (B7-1) es un ligando coestimulador inducible de la superfamilia de las inmunoglobulinas, expresado principalmente en las células presentadoras de antígeno, que se une a CD28 y CTLA-4 para modular la activación, la proliferación y la tolerancia de las células T. Al integrarse con la señalización del TCR, CD80 influye en los programas aguas abajo de PI3K–AKT, NF-κB y de transcripción de citocinas que moldean las respuestas inmunitarias adaptativas. La expresión desregulada de CD80 se ha implicado en alteraciones del equilibrio de los puntos de control inmunitarios y en una presentación antigénica aberrante observada en contextos inflamatorios y autoinmunes, y se estudia con frecuencia en el marco de las interacciones tumor–sistema inmune. Como marcador de superficie con una biología de receptores bien definida, CD80 se utiliza de forma rutinaria para analizar la maduración de las APC, los umbrales de coestimulación y la formación de la sinapsis inmunológica en modelos celulares humanos.

B7-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CD80 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CD80. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CD80. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CD80 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.