B7-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419570-ACT

O gene **Cd80** em camundongos codifica o ligante coestimulatório **B7-1 (CD80)**, um regulador fundamental da imunidade adaptativa, expresso em células apresentadoras de antígeno, como células dendríticas, macrófagos e células B ativadas. O B7-1 interage com **CD28** para promover o priming de células T, a produção de citocinas e a expansão clonal, e liga-se ao **CTLA-4** para modular os limiares de ativação e manter a homeostase imunológica. Por meio dessas interações com receptores, **Cd80** influencia a formação da sinapse imunológica, programas de sinalização induzidos por antígeno e o equilíbrio entre respostas de células T efetoras e regulatórias. A expressão desregulada de **CD80** tem sido associada a alterações na ativação imune em inflamação e autoimunidade e pode moldar microambientes imunológicos antitumorais em modelos murinos de doença.

B7-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cd80 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

B7-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cd80 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cd80, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de B7-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cd80 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de B7-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via B7-1 em células tumorais com expressão de Cd80 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.