Plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP7B (m): sc-419260

Présentation

Le gène murin *Atp7b* code ATP7B, une ATPase de type P assurant le transport du cuivre, qui régule la distribution intracellulaire du cuivre en navettant entre le réseau trans-golgien et des compartiments vésiculaires en réponse à la charge en cuivre. ATP7B favorise la maturation des cuproenzymes dans la voie sécrétoire et assure la séquestration ainsi que l’export du cuivre, en s’intégrant à l’homéostasie cellulaire des métaux et aux réponses au stress oxydatif. La perturbation de la gestion du cuivre dépendante d’ATP7B altère l’équilibre rédox, le trafic des protéines et la fonction mitochondriale, faisant d’*Atp7b* un nœud central pour l’étude du métabolisme du cuivre et de la physiopathologie associée. Chez la souris, *Atp7b* est largement utilisé pour modéliser des phénotypes génétiques de surcharge en cuivre et pour explorer les mécanismes hépatiques et neurologiques liés à la dysrégulation de l’homéostasie des métaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP7B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Atp7b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Atp7b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Atp7b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ATP7B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Atp7b pour l'étude de la signalisation de ATP7B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Atp7b essentiels à la fonction de ATP7B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Atp7b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ATP7B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ATP7B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Atp7b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ATP7B plasmide HDR (m) et le ATP7B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Atp7b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Atp7b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.