ATF-6α CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400259-ACT

ATF6は、ER（小胞体）膜に係留されたbZIP型転写因子である活性化転写因子6α（ATF-6α）をコードしており、未折りたたみタンパク質応答（UPR）の主要なセンサー兼エフェクターとして機能する。ERストレスが生じると、ATF-6αは制御された膜内プロテアーゼ切断（regulated intramembrane proteolysis）を受けるためにゴルジ体へ輸送され、核内フラグメントが放出される。このフラグメントは、ERシャペロン、ER関連分解（ERAD）、およびプロテオスタシスに関与する遺伝子群を誘導する。PERK–eIF2α–ATF4およびIRE1–XBP1シグナルとのクロストークを通じて、ATF-6αは分泌経路容量の適応的な再編成と細胞のストレス耐性を協調的に制御する。ATF6/UPRシグナルの制御破綻は、代謝機能障害、炎症、神経変性、腫瘍細胞のストレス適応などの状況で関与が示唆されており、ATF6はプロテオスタシスとストレスシグナルの機構研究における有用な結節点となっている。

ATF-6α CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATF6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ATF-6α CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATF6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATF6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ATF-6αの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATF6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるATF-6α依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATF6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるATF-6α経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。