Plásmido CRISPR de Activación (h) ASH1L: sc-402901-ACT

ASH1L (discos 1 tipo ausentes, pequeños o homeóticos) codifica una metiltransferasa nuclear de lisina de histonas que deposita la metilación de H3K36 para favorecer la elongación transcripcional y mantener programas de expresión génica específicos del tipo celular. A través de sus dominios lector de cromatina y catalítico, ASH1L ayuda a equilibrar la represión y la activación mediadas por Polycomb en loci del desarrollo, influyendo en procesos como la diferenciación neuronal y el compromiso de linaje. El control epigenético regulado por ASH1L se entrecruza con vías que gobiernan la remodelación de la cromatina, la actividad de potenciadores (enhancers) y la fidelidad transcripcional. La variación genética o la desregulación de ASH1L se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con redes de regulación génica alteradas, lo que lo convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de la transcripción impulsada por la cromatina.

ASH1L El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ASH1L sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ASH1L El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ASH1L en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ASH1L, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ASH1L. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ASH1L y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ASH1L en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ASH1L en células tumorales con expresión de ASH1L silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.