Particules Lentivirales d'Activation (h) ARMER: sc-409837-LAC

ARL6IP1 code pour ARMER, une protéine membranaire résidente du réticulum endoplasmique (RE) impliquée dans le maintien de l’homéostasie du RE et la régulation de l’apoptose via la modulation de la signalisation du stress du RE. ARMER a été associée aux voies de la réponse aux protéines mal conformées (UPR) et à des processus liés au RE qui influencent la survie cellulaire, la gestion du calcium et la protéostase en conditions de stress. Des variations de l’expression d’ARL6IP1 ont été rapportées dans divers contextes impliquant une apoptose dérégulée et l’adaptation au stress, notamment en cancérologie et en neurobiologie, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques des voies de survie et de la tolérance au stress. En tant que cible humaine, ARMER constitue un nœud utile pour explorer l’interface entre le stress du RE et les voies apoptotiques mitochondriales, ainsi que des réseaux plus larges de contrôle qualité cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales ARMER (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ARL6IP1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ARMER (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ARL6IP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ARMER. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ARL6IP1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.