ARMCX1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-407214-LAC

ARMCX1 (armadillo repeat containing, X-linked 1) codifica una proteina con ripetizioni armadillo coinvolta nel traffico intracellulare e nella dinamica mitocondriale, con un ruolo nel coordinare le interazioni del citoscheletro e il posizionamento degli organelli. In quanto membro della famiglia ALEX/ARMCX, ARMCX1 è associato all’omeostasi neuronale e metabolica, influenzando processi quali il trasporto mitocondriale e la risposta allo stress. Un’alterata espressione di ARMCX1 è stata riportata in studi trascrittomici in molteplici contesti tumorali e in dataset rilevanti per l’ambito neurologico, supportandone l’uso come punto di ingresso molecolare per indagare vie legate a proliferazione, apoptosi e adattamento cellulare. Queste caratteristiche rendono ARMCX1 un bersaglio utile per analizzare reti regolatorie che collegano l’organizzazione subcellulare a fenotipi associati alla malattia in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale ARMCX1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ARMCX1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ARMCX1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ARMCX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ARMCX1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ARMCX1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.