Plásmido Doble Nickase (h) ARHGAP29: sc-407394-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ARHGAP29 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ARHGAP29 (h) y el plásmido de doble nickasa ARHGAP29 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ARHGAP29. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ARHGAP29 Anticuerpo (D-3): sc-365554
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ARHGAP29 | sc-407394-NIC | 20 µg | $410.00 |
ARHGAP29 codifica una proteína activadora de GTPasas Rho que regula negativamente la señalización de RhoA al acelerar la hidrólisis de GTP, modulando así la remodelación del citoesqueleto de actina, la polaridad celular y la dinámica de las uniones. Mediante el control de la contractilidad dependiente de RhoA/ROCK, ARHGAP29 contribuye a la morfogénesis epitelial, la migración celular y la integridad tisular. Estudios genéticos y funcionales vinculan ARHGAP29 con el desarrollo craneofacial, con variantes asociadas a labio leporino y/o paladar hendido no sindrómicos, y con una relevancia más amplia para vías que gobiernan la adhesión y la tensión del citoesqueleto. Su actividad lo convierte en un objetivo útil para desentrañar los circuitos de las GTPasas de la familia Rho y los fenotipos relacionados con la mecanotransducción en modelos de células humanas.
ARHGAP29 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ARHGAP29 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ARHGAP29. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ARHGAP29. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ARHGAP29 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.