ARH1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-410678-ACT-2

O gene humano ADPRH codifica a ADP-ribosilarginina hidrolase 1 (ARH1), uma enzima citosólica que remove mono-ADP-ribose de resíduos de arginina em proteínas, revertendo a ADP-ribosilação específica de arginina e moldando o turnover celular de ADP-ribose. Ao contrabalançar a modificação mediada por ARTs, a ARH1 contribui para a regulação de respostas ao estresse, da transdução de sinais e da homeostase proteica no contexto mais amplo das vias de mono-ADP-ribosilação dependentes de NAD⁺. Dinâmicas desreguladas de ADP-ribosilação envolvendo o ADPRH foram associadas, em sistemas experimentais, a alterações na suscetibilidade a modificações mediadas por toxinas e a fenótipos relevantes para a supressão tumoral e a sinalização inflamatória. A edição gênica de ADPRH permite estudos mecanísticos da ADP-ribosilação reversível, do crosstalk de vias com redes de dano ao DNA e de sinalização imune, e triagens de genômica funcional voltadas ao controle de modificações pós-traducionais.

ARH1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADPRH sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ARH1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADPRH em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADPRH, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ARH1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADPRH nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ARH1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ARH1 em células tumorais com expressão de ADPRH silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.