Aquaporin 5/AQP5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419176

Panoramica

Aqp5 codifica l’Acquaporina 5 (AQP5), un canale d’acqua di membrana che favorisce il rapido movimento osmotico dell’acqua attraverso le barriere epiteliali nei tessuti secretori, come le ghiandole salivari e lacrimali e le vie aeree. Regolando il trasporto di fluidi transepiteliale e contribuendo all’omeostasi del volume delle cellule epiteliali, AQP5 influenza processi quali l’idratazione della superficie delle vie aeree, la secrezione ghiandolare e la funzione di barriera. Alterazioni dell’espressione o della localizzazione di AQP5 sono state associate a una gestione anomala dei fluidi e al rimodellamento epiteliale nelle patologie infiammatorie delle vie aeree, nella disfunzione delle ghiandole esocrine e nelle risposte tissutali associate all’edema. Nei modelli murini, Aqp5 è spesso studiato nel contesto della differenziazione epiteliale, dell’accoppiamento tra trasporto ionico e dell’acqua e della segnalazione responsiva allo stress che modella la fisiologia delle mucose.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 5/AQP5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Aqp5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Aqp5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Aqp5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Aquaporin 5/AQP5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Aqp5 per lo studio della segnalazione di Aquaporin 5/AQP5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Aqp5 critici per la funzione di Aquaporin 5/AQP5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Aqp5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Aquaporin 5/AQP5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Aquaporin 5/AQP5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Aqp5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Aquaporin 5/AQP5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Aquaporin 5/AQP5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Aqp5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Aqp5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.