Aquaporin 3/AQP3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419174

Descripción general

Aqp3 codifica la acuaporina 3 (AQP3), un canal de la membrana plasmática del tipo aquagliceroporina que facilita el transporte transmembrana de agua, glicerol y otros solutos pequeños, influyendo en el equilibrio osmótico celular y en la disponibilidad de sustratos metabólicos. En tejidos de ratón como el riñón, la piel y el epitelio gastrointestinal, AQP3 contribuye a la hidratación de la barrera epitelial, la regulación del volumen y el metabolismo energético dependiente de glicerol, vinculando el transporte de membrana con la adaptación al estrés y la proliferación. La actividad de AQP3 puede modular la señalización relacionada con el estado redox mediante sus efectos sobre el flujo intracelular de solutos, y se estudia con frecuencia en contextos de homeostasis epitelial, inflamación y remodelación. La expresión o localización desregulada de AQP3 se ha asociado con alteraciones en la reparación de heridas y fenotipos cutáneos inflamatorios, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de la función de barrera y de la disfunción epitelial asociada a enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 3/AQP3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Aqp3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Aqp3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Aqp3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Aquaporin 3/AQP3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Aqp3 para la investigación de la señalización de Aquaporin 3/AQP3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Aqp3 críticos para la función de Aquaporin 3/AQP3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Aqp3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Aquaporin 3/AQP3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Aquaporin 3/AQP3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Aqp3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Aquaporin 3/AQP3 (m) y el plásmido HDR Aquaporin 3/AQP3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Aqp3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Aqp3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.