apoO Plasmide Double Nickase (h): sc-413137-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- apoO Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il apoO Double Nickase Plasmid (h) e il apoO Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira APOO. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
apoO Plasmide Double Nickase (h) | sc-413137-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
apoO Plasmide Double Nickase (h2) | sc-413137-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’APOO umano codifica l’apolipoproteina O (apoO), un’apolipoproteina associata ai mitocondri implicata nella regolazione della fosforilazione ossidativa e del metabolismo energetico cellulare. apoO è stata collegata all’organizzazione della membrana mitocondriale e all’omeostasi redox, connettendola a vie che regolano la gestione dei lipidi, l’equilibrio delle specie reattive dell’ossigeno e la segnalazione responsiva allo stress. Un’alterata espressione di APOO è stata riportata in contesti di disfunzione metabolica e di fenotipi legati all’apparato cardiovascolare, in linea con un ruolo nelle prestazioni mitocondriali e nei processi associati ai lipidi. Queste caratteristiche rendono APOO un bersaglio utile per analizzare come le interazioni lipide-proteina mitocondriali influenzino lo stato bioenergetico e i programmi trascrizionali a valle.
apoO Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus APOO nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di APOO. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di APOO. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con APOO interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.