Apolipoprotein A I/APOA1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400499-ACT

APOA1 codifica l’apolipoproteina A-I, la principale componente proteica delle particelle di lipoproteine ad alta densità (HDL) e un mediatore centrale dell’omeostasi del colesterolo. ApoA-I promuove l’efflusso di colesterolo e fosfolipidi dipendente dai trasportatori della famiglia ABC (in particolare tramite ABCA1 e ABCG1), sostiene la biogenesi delle HDL nascenti e partecipa al trasporto inverso del colesterolo verso il fegato. Attraverso interazioni con la lecitina-colesterolo aciltransferasi (LCAT) e con le vie di rimodellamento delle HDL, APOA1 influenza la maturazione delle lipoproteine e il traffico sistemico dei lipidi. Una regolazione anomala dell’espressione o della funzione di APOA1 è associata ad alterazioni del metabolismo delle HDL ed è ampiamente studiata nel contesto della biologia dell’aterosclerosi, delle risposte infiammatorie e dei meccanismi delle malattie metaboliche.

Apolipoprotein A I/APOA1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di APOA1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Apolipoprotein A I/APOA1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus APOA1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione APOA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Apolipoprotein A I/APOA1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus APOA1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Apolipoprotein A I/APOA1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Apolipoprotein A I/APOA1 nelle cellule tumorali con espressione di APOA1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.